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免 疫熒光技術(shù)間接法優(yōu)缺點(diǎn)
免 疫熒光(immunofluorescence technic)以熒光物質(zhì)標(biāo)記抗體而進(jìn)行抗原定位的技術(shù)稱為熒光抗體技術(shù)(fluorescentantibodytechnique)。用熒光物標(biāo)記抗體來檢測細(xì)胞或組織中相應(yīng)抗原或抗體的技術(shù)。熒光物種類一般有異硫氰酸熒光素、羅丹明熒光素、二氯三嗪基氨基熒光素等。
間接法是目前常用的方法。首先用已知未標(biāo)記的抗體(第1抗體)與待檢抗原反應(yīng)或用未知抗體與已知抗原反應(yīng),反應(yīng)一定時間后,洗去未結(jié)合的抗體,再與標(biāo)記的抗免 疫球蛋白抗體(二抗)反應(yīng)。在第1步反應(yīng)中,若抗原抗體發(fā)生了反應(yīng),則抗體被固定在標(biāo)本上,那么第2步反應(yīng)中標(biāo)記的抗體(二抗)必然與第1步反應(yīng)形成的抗原抗體復(fù)合物中的抗體發(fā)生反應(yīng),這樣就可以通過二抗的示蹤,對標(biāo)本中未知抗原或抗體進(jìn)行鑒定。
其優(yōu)點(diǎn)為:
①敏感性較高,是直接法的5-10倍;
②用一種標(biāo)記的抗體,就能與一種以上的相應(yīng)的抗體或抗原配合鑒定多種未知的抗原或抗體;
③既能鑒定未知抗原,又能鑒定未知抗體。
其缺點(diǎn)有:
①在反應(yīng)中有多種因子參與,容易產(chǎn)生非特異性染色,結(jié)果判斷有時較困難;
②操作步驟多,費(fèi)時。