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RT-PCR常見RNA酶抑制劑是什么

日期:2025-04-26 02:45
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摘要: 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總 RNA,以其中的 mRNA 作為模板,采用 Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成 cDNA。常見RNA酶抑制劑: 1. 焦磷酸二乙酯(DEPC):是一種強烈但不徹底的RNA酶抑制劑。它通過和RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性,從而抑制酶的活性。 2. 異硫氰酸胍:目前被認為是有效的RNA酶抑制劑,它在裂解組織的同時也使RNA酶失活。它既可破壞細胞結(jié)構(gòu)使核酸從核蛋白中解離出來,又對...

    逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總 RNA,以其中的 mRNA 作為模板,采用 Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成 cDNA。常見RNA酶抑制劑:

1. 焦磷酸二乙酯(DEPC):是一種強烈但不徹底的RNA酶抑制劑。它通過和RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性,從而抑制酶的活性。

2. 異硫氰酸胍:目前被認為是有效的RNA酶抑制劑,它在裂解組織的同時也使RNA酶失活。它既可破壞細胞結(jié)構(gòu)使核酸從核蛋白中解離出來,又對RNA酶有強烈的變性作用。

3. 氧釩核糖核苷復合物:由氧化釩離子和核苷形成的復合物,它和RNA酶結(jié)合形成過渡態(tài)類物質(zhì),幾乎能完全抑制RNA酶的活性。

4. RNA酶的蛋白抑制劑(RNasin):從大鼠肝或人胎盤中提取得來的酸性糖蛋白。RNasin是RNA酶的一種非競爭性抑制劑,可以和多種RNA酶結(jié)合,使其失活。

5. 其它:SDS、尿素、硅藻土等對RNA酶也有一定抑制作用。

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