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RT-PCR 反應(yīng)?優(yōu)化及注意事項(xiàng)
日期：2025-04-23 12:29
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摘要：RT-PCR 反應(yīng)優(yōu)化及注意事項(xiàng)：
1、逆轉(zhuǎn)錄 PCR 時(shí)，提取 RNA 是關(guān)鍵，需分離高質(zhì)量 RNA（純度和完整性）。
2、 整個(gè)操作過(guò)程需使用去 RNA 酶的槍頭、EP 管等耗材。
3、 逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中要謹(jǐn)防 RNA 酶的污染，加入 RNA 酶抑制劑。
4、 為了防止非特異性擴(kuò)增，必須設(shè)陰性對(duì)照。
5、 逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)應(yīng)全程在冰上操作完成，操作過(guò)程應(yīng)避免 RNase 污染。
6、 提高逆轉(zhuǎn)錄預(yù)熱溫度（也可根據(jù)相應(yīng)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行調(diào)整）。
7、 減少基因組 DNA 污染，可使用去基因組的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒。
1、逆轉(zhuǎn)錄 PCR 時(shí)，提取 RNA 是關(guān)鍵，需分離高質(zhì)量 RNA（純度和完整性）。
2、 整個(gè)操作過(guò)程需使用去 RNA 酶的槍頭、EP 管等耗材。
3、 逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中要謹(jǐn)防 RNA 酶的污染，加入 RNA 酶抑制劑。
4、 為了防止非特異性擴(kuò)增，必須設(shè)陰性對(duì)照。
5、 逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)應(yīng)全程在冰上操作完成，操作過(guò)程應(yīng)避免 RNase 污染。
6、 提高逆轉(zhuǎn)錄預(yù)熱溫度（也可根據(jù)相應(yīng)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行調(diào)整）。
7、 減少基因組 DNA 污染，可使用去基因組的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒。