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有血清時轉(zhuǎn)染的注意事項?
有血清時的轉(zhuǎn)染
血清一度曾被認(rèn)為會降低轉(zhuǎn)染效率，但只要在DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時不含血清，在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的。
轉(zhuǎn)染過程在兩步中需要使用培養(yǎng)基做為稀釋液：在DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物準(zhǔn)備過程以及復(fù)合物同細胞接觸過程。
在開始準(zhǔn)備DNA和陽離子脂質(zhì)體試劑稀釋液時要使用無血清的培養(yǎng)基，因為血清會影響復(fù)合物的形成。但在復(fù)合物形成后，在加入細胞中前可以加入血清。
陽離子脂質(zhì)體和DNA的*佳量在使用血清時會有所不同，因此如果你想在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進行優(yōu)化。
大部分細胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個小時內(nèi)保持健康。對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用一些營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清。
對于對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用LIPOFECTAMINE 2000。
細胞狀態(tài)
眾所周知，細胞的生長狀態(tài)影響實驗結(jié)果，原代細胞和傳代次數(shù)多的細胞都不是*佳選擇，處于對數(shù)生長期的細胞生長狀態(tài)*好，*適合轉(zhuǎn)染。
同時，我們都知道細胞的密度不宜過大，大家往往注意的都是轉(zhuǎn)染前的密度，失敗過很多次的經(jīng)歷告訴大家，轉(zhuǎn)染后的細胞密度更加重要。
有時候轉(zhuǎn)染時間太久，等到進行后續(xù)實驗時細胞已經(jīng)肆意生長，漂起來了，豈不前功盡棄，流著眼淚也要告訴大家，考慮好細胞的生長周期和轉(zhuǎn)染的時間進行鋪板，建議選擇50%~80%區(qū)間密度進行細胞轉(zhuǎn)染。