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操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
貨號 |
AMZ2人古梅斯蛋白2免費代測試劑盒 |
Human Archaemetzincin 2(AMZ2)ELISA Kit |
PH101907 |
優(yōu)勢特點:產(chǎn)品僅用于科研
1.高效、靈敏、特異的抗體;
2.穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
3.吸附性能好,空白值低,孔低透明度高的固相載體;
4.使用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)液、尿液、唾液等等多種標本類型;
5.節(jié)省實驗經(jīng)費。
組成及試劑配制 :
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標準品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為100 ng/ml,做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋)后,分別稀釋成100 ng/ml,50 ng/ml,25 ng/ml,12.5 ng/ml,6.25 ng/ml,3.12 ng/ml,1.56 ng/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 ng/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制50 ng/ml標準品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液:1×20ml/瓶。
4. 檢測稀釋液A:1×10ml/瓶。
5. 檢測稀釋液B:1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(100ul/孔),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10ul檢測溶液A加990ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
7. 檢測溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
隱色孔雀石綠(標準品)質(zhì)量規(guī)格:分析標準品Leucomalachite Green rabbitC-ReactiveProtein,CRPELISA試劑盒兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 可溶性CD30配體(sCD30L)ELISA試劑盒 ,英文名: sCD30L ELISA Kit
二十酸甲酯(標準品)質(zhì)量規(guī)格:≥98.0%(GC)Methyl Arachidate 小鼠雌受體β(ERβ)ELISA試劑盒 ,英文名: ERβ ELISA Kit ratEndothelin1,ET-1ELISA試劑盒大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
反式玉米素質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細胞培養(yǎng)trans-Zeatin 人優(yōu)球蛋白(EL)ELISA檢測試劑盒HumanEuglobulinLysis,ELELISAKit 96T/48T HumandipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISA試劑盒人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
氯亞鉑酸鉀 質(zhì)量規(guī)格:BR,鉑含量 ≥46%,原始鉑粉度>99.95% Dipotassium
tetrachloroplatinate 大鼠卵泡抑素(FS)試劑盒 Rat Follistatin,FS ELISA
Kit HumanHeatShockProtein40,HSP-40ELISAKit人熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
酞菁(>93.0%(N))Phthalocyanine質(zhì)量規(guī)格:>93.0%(N) RatSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit大鼠S100B蛋白(S-100B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人鼻病毒(RhV)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
顏料藍15,酞菁藍BPigment Blue 15質(zhì)量規(guī)格: IL蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25 兔子壞死因子α(TNF-α)試劑盒 Rabbit Tumor necrosis factor α,TNFα ELISA Kit
5-羥基羅格列酮硫酸鹽5-Hydroxy Rosiglitazone Sulfate質(zhì)量規(guī)格:美國進口 NudemouseAlpha-fetoprotein,AFPELISA試劑盒裸鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 絲酸/蘇酸蛋白激酶B-raf(BRAF)ELISA試劑盒 ,英文名: BRAF ELISA Kit
N-去甲基羅格列酮N-Desmethyl Rosiglitazone質(zhì)量規(guī)格:美國進口 小鼠甲狀腺素(T4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Peanagglinin,PNAELISA試劑盒花生凝集素(PNA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
洛沙坦N2-葡萄糖苷酸Losartan N2-Glucuronide質(zhì)量規(guī)格:美國進口
HumanCCAAT/enhancerbindingproteinepsilon,C/EBPεELISAKit 人CCAAT增強子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
洛沙坦Losartan質(zhì)量規(guī)格:美國進口 ChickenMyoglobin,MYO/MBELISA試劑盒雞肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 小鼠凝血因子Ⅷ(FⅧ)試劑盒 Mouse coagulation factor Ⅷ,FⅧ ELISA Kit
洛匹那韋代謝產(chǎn)物M-3/M-4Lopinavir Metabolite M-3/M-4質(zhì)量規(guī)格:美國進口 載玻片細胞P16蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 特異性生長因子(TSGF)ELISA試劑盒 ,英文名: TSGF ELISA Kit
褪素-d4Melatonin-d4質(zhì)量規(guī)格:美國進口 MouseFreeTestoterone,F-TESTOELISAKit小鼠游離睪同(F-TESTO)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T HumauberculosisaibodyIgG,TB-AbIgGELISA試劑盒人結(jié)核菌桿抗體IgG(TB-AbIgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
注意事項:
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標準品孔孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
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